原代細(xì)胞培養(yǎng)是指從活體中獲取的組織或細(xì)胞,在體外模擬體內(nèi)的生理環(huán)境,在 無菌、適當(dāng)溫度和一定營養(yǎng)條件下,使之生存、生長和繁殖,下面由喆圖小編帶大家了解一下原代細(xì)胞培養(yǎng)中產(chǎn)生的問題。

錯誤1：一小管原代細(xì)胞在水浴中解凍一段時間

糾正1：原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞，并置于培養(yǎng)箱中。

錯誤2：解凍match小瓶后直接離心原代細(xì)胞

糾正2：我們不建議在解凍后離心細(xì)胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯誤3：允許原代細(xì)胞變得過于融合

糾正3：當(dāng)生長至100％匯合時，原代細(xì)胞可以變得衰老。記住，原代細(xì)胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95％融合時，對原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

錯誤4：傳代原代細(xì)胞時過度胰蛋白酶消化

糾正4：當(dāng)細(xì)胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后*中和細(xì)胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細(xì)胞。

錯誤5：原代細(xì)胞可以很容易地重新凍存

糾正5：通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因為這可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。

錯誤6：原代細(xì)胞可以無限的增殖

糾正6：與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài)，因為少量混雜的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細(xì)胞。

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